親和純化樹(shù)脂和方法

親和純化（也稱為親和色譜）被認(rèn)為是強(qiáng)大的方法 純化色譜 或從復(fù)雜的混合物（如粗細(xì)胞裂解物、細(xì)胞培養(yǎng)上清液或其他樣品）中富集感興趣的蛋白質(zhì)。 

雖然選擇性沉淀可能在某種程度上有助于分離不同類型的大分子，但大多數(shù)純化方法依賴于溶液中分子與固體、固定材料的物理或化學(xué)相互作用的差異來(lái)達(dá)到預(yù)期的結(jié)果。 

例如，在親和純化中，通過(guò)用與所需分子特異性結(jié)合的化學(xué)固定配體處理固體載體，將目標(biāo)分子與溶液中的其他組分分離。因此，當(dāng)復(fù)雜的混合物通過(guò)色譜柱時(shí)，目標(biāo)分子與配體結(jié)合，而溶液中的非結(jié)合組分則簡(jiǎn)單地用適當(dāng)?shù)木彌_液沖洗掉。 

最后，改變緩沖條件以破壞配體和目標(biāo)分子之間的結(jié)合相互作用，并在此過(guò)程中洗脫高度純化的目標(biāo)分子。

親和純化功能非常強(qiáng)大，因?yàn)橥ㄟ^(guò)親和柱一次，可以將樣品純化一千倍以上。

親和純化的堅(jiān)實(shí)支撐

基本上，親和色譜中使用兩種類型的固體載體：多孔凝膠載體或樹(shù)脂和磁珠。但是，在本文中，我們將主要關(guān)注親和純化樹(shù)脂。

樹(shù)脂或凝膠載體通常是基于糖或丙烯酰胺的聚合物樹(shù)脂，在溶液中產(chǎn)生 直徑50-150μm的珠子。除了極其多孔之外，珠子還足夠大，允許生物分子在磁珠表面周圍以及通過(guò)和在珠子之間暢通無(wú)阻地移動(dòng)。此外，串珠形式也使實(shí)驗(yàn)室的工作更容易、更方便，因?yàn)樗鼈兛梢院苋菀椎胤峙湟园b任何尺寸的色譜柱。

此外，由于配體共價(jià)連接到珠狀聚合物的外表面和內(nèi)表面，因此允許樣品分子自由流動(dòng)通過(guò)固定配體的高表面積。

目前，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用交聯(lián)珠狀瓊脂糖進(jìn)行蛋白質(zhì)親和純化，因?yàn)樗侵亓α?、低壓程序和低速離心的理想選擇。珠狀瓊脂糖樹(shù)脂也可以進(jìn)行額外的交聯(lián)和化學(xué)硬化，以提高其承受高壓的能力，但要預(yù)先警告，這會(huì)顯著降低結(jié)合能力。

該基質(zhì)通常具有4%（CL-4B）和6%（CL-6B）密度，均具有培養(yǎng)基偶聯(lián)能力，適用于相同的應(yīng)用（蛋白質(zhì)印跡、高通量篩選、相互作用研究、突變分析、功能測(cè)定、結(jié)構(gòu)分析）。磁珠的尺寸通常在 45 至 165 μm 之間，它們都具有 0.35 MPa 的壓力限制。它們僅在排除限制方面有所不同（CL-4B 為 20，000 kDa，CL-6B 為 4，000 kDa）。

除瓊脂糖凝膠外，聚丙烯酰胺基樹(shù)脂也可用于柱親和色譜。雖然這兩種介質(zhì)都具有較低的非特異性結(jié)合特性，但聚丙烯酰胺基樹(shù)脂不易壓縮，可以承受中壓應(yīng)用。

G-Biosciences 提供廣泛的親和純化試劑盒和樹(shù)脂，以適應(yīng)各種應(yīng)用。這里有一些 例子 這可以幫助您解決親和純化挑戰(zhàn)。  

• 用于親和素-鏈霉親和素和中性粒蛋白純化的固定化生物素和亞胺生物素樹(shù)脂

• 鈣調(diào)蛋白樹(shù)脂用于純化鈣調(diào)蛋白結(jié)合蛋白 （CBP）

• 固定化對(duì)氨基苯基磷酸膽堿和更具成本效益的固定化O-磷酸乙醇胺用于C反應(yīng)蛋白純化

• GST 標(biāo)記或 His 標(biāo)記的蛋白質(zhì)純化試劑盒或樹(shù)脂

• 固定化肝素和凝集素，用于分離脂蛋白、生長(zhǎng)激素、止血蛋白和其他生理標(biāo)志物

• 硫丙基樹(shù)脂 用于純化含蛋白質(zhì)的硫醇基團(tuán)。

G-Biosciences提供含大量用于純化蛋白質(zhì)、核酸和其他生物分子的樹(shù)脂和磁珠。 幾種樹(shù)脂通常用于在純化過(guò)程中去除干擾劑。 該手冊(cè)首先介紹了預(yù)活化的樹(shù)脂，以便研究人員可以通過(guò)各種基團(tuán)偶聯(lián)蛋白質(zhì)和其他生物分子。接下來(lái)的部分是用于純化特定標(biāo)簽和基序的樹(shù)脂，包括6X組氨酸、生物素等。 主要色譜樹(shù)脂包括用于離子交換色譜和體積排阻色譜的樹(shù)脂。 最后，大量樹(shù)脂旨在去除常見(jiàn)的有問(wèn)題的化學(xué)物質(zhì)和生物分子，包括洗滌劑、內(nèi)毒素等。

《純化樹(shù)脂手冊(cè)》包括以下部分：

• 親和純化樹(shù)脂
  

• 用于偶聯(lián)巰基、胺、羧基、碳水化合物和活性氫的預(yù)活化樹(shù)脂

• 親和素和鏈霉親和素純化樹(shù)脂
  

• 固定化生物素和低親和力的伊尼博汀

• 用于純化生物素和生物素標(biāo)記分子的樹(shù)脂

• 固定化親和素和單體親和素以及低親和力鏈霉親和素

• 用于CBP標(biāo)簽的鈣調(diào)蛋白樹(shù)脂

• C-反應(yīng)蛋白純化樹(shù)脂

• GST標(biāo)記的蛋白質(zhì)純化

• 用于酵母和細(xì)菌重組蛋白的谷胱甘肽樹(shù)脂和蛋白質(zhì)純化試劑盒

• 組氨酸標(biāo)記蛋白純化

• IDA 和 NTA 樹(shù)脂、色譜柱、板和磁珠

• 提供鎳、鈷、銅和鋅版本

• 固定化肝素

• 用于碳水化合物分離的固定化凝集素

• 凝集素純化樹(shù)脂

• 核酸純化樹(shù)脂

• 固定化硼酸和二氧化硅磁珠

• 蛋白酶純化樹(shù)脂

• 抗體純化樹(shù)脂

• 蛋白 A、蛋白 G 和蛋白 A/G 樹(shù)脂和色譜柱

• IgA純化樹(shù)脂

• 親硫吸附

• 凝膠過(guò)濾/體積排阻色譜

• 疏水作用色譜

• 離子交換色譜

• 陰陽(yáng)離子交換器

• 除污樹(shù)脂

• 去污樹(shù)脂

• 內(nèi)毒素去除樹(shù)脂

• 脫鹽和緩沖液交換離心柱

• 還原劑樹(shù)脂，包括TCEP

• 去除白蛋白

• 多種一次性色譜柱可供選擇