如何測量LOD，以及我們如何實現熒光素的皮摩爾檢測

確定檢測限

檢測限（LOD）定義為低濃度分析物的存在或不存在可以是使用給定的分析方法確定。樣本產生的信號（綠線）必須通過舒適的裕度（藍線），以便確信分析物

真正被檢測到。檢測限（LOD）通常為定義為信號的樣本濃度等于噪聲水平的3倍并且受到系統噪聲的限制。

測量熒光素

從5nM到5pM的一系列熒光素稀釋液使用0.1NaOH溶液制備，并在10mm內測量路徑長度石英比色杯。熒光測量結果.使用WP VIS光譜儀，50μm狹縫，使用450 nm.用于激勵的LED。我們自己的快速反應杯支架已連接光譜儀的自由空間訪問光譜儀的全f/2.0視野，最大限度地收集光線。熒光素對于低至5pM的樣品，在積分時間僅為50ms，平均值為50x。

噪聲的重要性

光譜儀測量中的噪聲可能包括熱噪聲.噪聲（暗噪聲，當探測器未照明時），發射噪聲（計數噪聲，由光子的概率引起產生電流）、讀出噪聲（由于檢測器電路），以及固定模式噪聲（取決于二極管陣列）。雜散光也可能導致噪聲，并且應該將其最小化。這個我們50個空白測量的標準偏差（stddev）0.1 M NaOH參考值的波長，并且發現非常低：4到7個計數。

通過設計最大限度地減少雜散光

雜散光是導致LOD降低的一個關鍵因素。那是為什么我們放置一個我們自己的匹配位于每個光柵中心的體相全息（VPH）光柵光譜儀，使用透射設計和像差校正光學器件，以保持光學器件中的每一個可能的光子路徑我們的VPH光柵提供高達40%的效率，具有更均勻的波長和偏振響應，以及與反射光柵相比具有超低散射，增強了我們穩健、熱穩定性設計的性能。

檢測和定量限度

作為濃度函數的信噪比為熒光素峰繪制，取信號（“樣本"-“空白"）與空白的在ln-ln尺度上繪制這一點揭示了高度線性擬合，指示高質量數據。外推到SNR=3，即極限我們系統的檢測限（LOD）僅為2pM！

定量限（LOQ）定義了兩個可以說樣品的濃度不同，需要SNR=10。我們的系統的LOQ被發現是6.6pM。

結論

LOD和LOQ是相當簡單的測量方法，可以實現緊湊型光譜儀的性能.以便直接與更靈敏的臺式系統進行比較。實現約2pM LOD，WP可見光熒光.該系統證明其自身足夠靈敏，可以與昂貴的臺式熒光計的典型0.5pM LOD相媲美。它靈敏、緊湊、快速，是集成到生物醫學儀器或現場的理想工具。