novocib人腺苷激酶說明書

NOVO CIB的人腺苷激酶是一種活性且純化的 345-aa 短形式^(14,2) ADK 蛋白（39kDa）通過 RT-PCR 擴(kuò)增從人肝癌細(xì)胞中提取的 mRNA 進(jìn)行克隆并在大腸桿菌中表達(dá)。克隆的 ADK 序列（GenBank 登錄號(hào) U50196）通過 DNA 測(cè)序進(jìn)行確認(rèn)（ 同一性）。

腺苷激酶是核苷類似物激活的關(guān)鍵酶。
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ADK 也是藥物發(fā)現(xiàn)的經(jīng)過驗(yàn)證的目標(biāo)：腺苷調(diào)節(jié)藥物已作為新的鎮(zhèn)痛和抗炎藥物 (4) 進(jìn)行了廣泛測(cè)試 (1)，用于治療精神分裂癥 (7) 或限制缺血性中風(fēng)后的腦損傷 (8) 。

腺苷激酶是一種普遍存在的酶，可催化 γ-磷酸鹽從 ATP 轉(zhuǎn)移到腺苷 (AR) 的 5'-羥基，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的重要調(diào)節(jié)劑，也是參與缺氧、炎癥和傷害感受的信號(hào)分子。腺苷激酶與腺苷脫氨酶一起調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的腺苷濃度。抑制腺苷激酶會(huì)導(dǎo)致局部腺苷濃度選擇性增加，并降低體內(nèi)癲癇發(fā)作易感性和傷害感受⁽³⁾。 ADK 功能障礙與多種病理有關(guān)，包括糖尿病⁽¹³⁾、癲癇⁽⁶⁾和癌癥。因此，ADK 成為藥物發(fā)現(xiàn)的合理治療靶點(diǎn)，腺苷調(diào)節(jié)藥物已被廣泛應(yīng)用。經(jīng)過測(cè)試⁽¹⁾作為新的鎮(zhèn)痛和抗炎藥物⁽⁴⁾用于治療精神分裂癥⁽⁷⁾或限制缺血性中風(fēng)后的腦損傷⁽⁸⁾。
人類ADK的X射線晶體結(jié)構(gòu)已得到描述⁽⁹⁾，為合理設(shè)計(jì)和優(yōu)化新型ADK抑制劑提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。此外，該酶負(fù)責(zé)多種治療上有用的核苷的磷酸化和隨后的臨床活性，包括抗病藥物利巴韋林⁽¹⁰⁾、免疫抑制藥物咪唑立賓⁽¹¹⁾和抗癌 C-核苷噻唑呋林⁽¹²⁾。

單位定義： 1 個(gè)單位的腺苷激酶在 pH 8、37°C 下每分鐘將 1.0 µmole 肌苷和 ATP 轉(zhuǎn)化為 IMP 和 ADP，由耦合的 IMPDH 酶系統(tǒng)測(cè)量。 比活性： ≥ 0.200 單位/毫克蛋白質(zhì)。 純度：通過12% AA SDS-PAGE控制。

測(cè)定條件：腺苷激酶與特定核苷底物的酶活性通過在偶聯(lián)的乳酸脫氫酶/丙酮酸激酶系統(tǒng)中的分光光度測(cè)定來測(cè)量。測(cè)定在 37℃、50mM Tris-HCl pH7.6 下進(jìn)行； 50mM KCl、5mM MgCl 2、2.5mM ATP、0.1mM NADH、1mM 磷酸烯醇丙酮酸、1mM DTT、PK 5U/ml、LDH 5U/ml。在 iEMS Reader MF (Labsystems) 微量滴定板讀數(shù)器中在 340 nm 處跟蹤反應(yīng)。核苷、核苷酸、LDH 和 PK 購(gòu)自 Sigma-Aldrich。