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      EvaGreen® 基于染料的 qPCR 預混液 介紹

      更新時間:2023-08-24      點擊次數:868

      特征:


      • EvaGreen® Dye – 信號比 SYBR® Green 更好,更安全、更環保

      • Cheetah™ Hotstart Taq – 在 95°C 下兩分鐘后全激活,以實現快速循環方案

      • 配備 2 色跟蹤系統,有助于發現移液錯誤,節省時間、試劑、DNA 樣本和 $$$

      • 可以不使用 ROX 被動染料,使用單獨的 ROX 管,或與 ROX 預混合(高濃度或低濃度)

      我們的Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR 主混合物是熱啟動 EvaGreen® 基于染料的主混合物,用于實時 PCR 應用和 DNA 熔解曲線分析。這些預混液可代替任何 SYBR® Green 染料基預混液。 Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR 主混合物含有低濃度的惰性藍色染料,使您可以輕松看到含有主混合物的孔。

      主混合物可不含 ROX 被動染料,帶有單獨的 ROX 管,或與 ROX 預混合(高濃度或低濃度)。試劑盒配有 2 色跟蹤系統,其中包括 DNA 模板緩沖液(一種深藍色染料),當與模板混合時,添加模板后會將反應從淺藍色變為深藍色(圖 1,左)。 2 色跟蹤系統可以防止移液錯誤,避免浪費時間、試劑和珍貴的 DNA 樣本。

      圖 1. 含有淺藍色染料的 Forget-Me-Not™ EvaGreen® Master Mix(2 色追蹤)在添加含有深藍色模板緩沖液的模板之前(左)和之后(右)。

      圖 2. Forget-Me-Not  EvaGreen® qPCR 主混合物的性能與其他基于染料的 PCR 主混合物一樣好或更好,具有出色的亮度和靈敏度。

      EvaGreen® 染料
      一種 DNA 結合染料,具有非常適合 qPCR 和高分辨率 Melting® (HRM) 分析*的功能。 EvaGreen® 染料通過新穎的“按需釋放"機制與 dsDNA 結合,允許在 qPCR 中使用相對較高的染料濃度,而不會產生 PCR 抑制(Mao, et al. 2007. BMC Biotech. 7, 76-91) 。

      EvaGreen® 染料的其安全性非常好。 DNA 結合染料本質上是危險的,因為它們有可能引起突變。考慮到這一點,Biotium 的科學家設計了 EvaGreen® 染料,使其無法穿過細胞膜,從而防止染料與活細胞中的基因組 DNA 接觸。所有其他商業 PCR 染料只需幾分鐘即可進入細胞。例如,SYBR® Green I 已被證明比溴化乙錠(一種的誘變劑)具有更大的環境毒性(Ohta, et al. 2001. Mut. Res. 492, 91-97)。獨立實驗室已證實 EvaGreen 染料不會導致突變、無細胞毒性,并且對水生生物來說是安全的,可以直接丟棄在排水溝中。

      基于 EvaGreen® 的預混液的另一個好處是,您可以通過凝膠電泳分析 PCR 產物,而無需在上樣緩沖液或凝膠中添加另一種 DNA 結合染料。主混合物中的 EvaGreen® 染料可充當 DNA 預染色劑,允許在電泳后直接觀察 DNA 帶。

      Cheetah™ HotStart Taq
      Cheetah™ HotStart Taq DNA 聚合酶是 Biotium 專有的化學修飾熱啟動 DNA 聚合酶。 Cheetah™ Taq 在室溫下全失活,在 95°C 2 分鐘后全激活,使其特別適合快速循環 PCR 方案。

      qPCR 預混液


      Forget-Me-Not™ 通用探針 qPCR Master Mix 是一款高性能產品,適用于基于熒光探針的 PCR 應用,包括定量和 SNP 基因分型。該試劑盒適用于所有基于熒光探針的技術,包括水解探針(例如 TaqMan® 和雙標記 BHQ® 探針)和位移探針(例如分子信標)。 Forget-Me-Not™ 通用探針 qPCR Master Mix 在單重和多重反應中顯示出出色的結果一致性,具有廣泛的儀器兼容性,并且可用于標準和快速方案。如果您的儀器需要 ROX 參考染料,ROX 還提供單獨的套件。

      該套件包括 40X Forget-Me-Not™ 跟蹤緩沖液,其中含有惰性藍色染料。您可以選擇將跟蹤緩沖液添加到預混液、DNA 模板中,或者在反應中不使用跟蹤緩沖液。在主混合物中添加跟蹤緩沖液可以讓您輕松區分含有反應混合物的孔和空孔。另一方面,將跟蹤緩沖液添加到 DNA 模板樣品中可讓您在設置 PCR 反應時跟蹤已添加模板的反應。

      圖 3.勿忘我通用探針預混液對于多重探針 PCR 反應效果非常好。


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