人結(jié)直腸癌細(xì)胞 （P53R）概述

傳代方法

復(fù)蘇步驟：①凍存管從液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中，迅速?zèng)]入37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以1min內(nèi)全部溶解為宜；②在超凈臺(tái)中將溶解好的細(xì)胞液加入到裝有9mL*全培養(yǎng)基的離心管內(nèi)，1000-1200rpm離心5min，棄去上清液，用1-2mL*全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。③將細(xì)胞懸液加入到含有5-6mL*全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
細(xì)胞傳代：①將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入1-2mL胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；②鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，肉眼可見細(xì)胞層脫落，即消化完成，否則繼續(xù)消化），直接吸掉胰酶，加入5-6mL*全培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。③將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中，添加適當(dāng)?shù)?全培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。；④注意培養(yǎng)基pH值變化和細(xì)胞密度，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí)，重復(fù)傳代操作或者凍存。

生長條件

培養(yǎng)溫度37℃；氣體環(huán)境5%CO2+95%空氣；

生長特性

貼壁生長

存儲(chǔ)條件

液氮

安全等級

0

形態(tài)

上皮細(xì)胞樣，短梭形，多角形，邊緣不規(guī)則，單層貼壁生長