SELEX技術原理及特點

SELEX技術是指數(shù)富集配體系統(tǒng)進化技術（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX）。利用該技術，可以從隨機單鏈核酸序列庫中篩選出與目標物質(zhì)具有高特異性和高親和力的核酸適體（Aptamers）。自Tuerk等人提出以來，SELEX技術經(jīng)過十多年的發(fā)展，已成為一種重要的研究方法和工具。

SELEX技術原理
SELEX技術的基本思路是在體外化學合成單鏈寡核苷酸文庫，用其與目標物質(zhì)混合，混合物中目標物質(zhì)與核酸之間形成復合物，洗去核酸不與目標物質(zhì)結合，將目標物質(zhì)與目標物質(zhì)分離。以核酸分子為模板，通過PCR擴增與物質(zhì)結合的核酸分子，并進行下一輪篩選過程。通過反復篩選和擴增，一些不與目標物質(zhì)結合或與目標物質(zhì)親和力低或中等的DNA或RNA分子被洗掉，而適配體（Adaptor Protein）則是與目標物質(zhì)親和力高的DNA或RNA分子。目標物質(zhì)。RNA是從一個非常大的隨機文庫中分離出來的，隨著SELEX過程的進行，純度從p摩爾增加到n摩爾，最終占據(jù)文庫的大部分（>90%左右）。 SELEX基于分子生物學技術合成了單鏈隨機寡核苷酸文庫。通常文庫容量為 10 英寸至 10 個單鏈寡核苷酸序列。文庫包括DNA文庫、RNA文庫和修飾的RNA文庫。文庫的中間是隨機序列，序列長度往往在20到40bp之間。隨機序列的兩端是帶有限制性內(nèi)切酶位點的固定序列，是聚合酶鏈式反應和其他酶促反應相關引物的結合位點。在隨機庫中，單鏈隨機寡核苷酸分子很容易形成多種三維結構，可以與自然界中幾乎所有種類的分子相互作用。特別是RNA分子容易形成發(fā)夾、假節(jié)、凸起、莖環(huán)、G四聚體等二級結構，更容易與蛋白質(zhì)、核酸和核酸相互作用。但它在體內(nèi)很容易被核酸酶降解，必須進行修飾，如嘧啶環(huán)的2'2F和2'2NH修飾。與RNA相比，DNA的生產(chǎn)成本較低，在體內(nèi)相對穩(wěn)定，不易被降解。從構建的文庫中篩選出的適配體（Adaptor Protein）更適合體外診斷和體內(nèi)治療。它可以與自然界中幾乎所有類型的分子相互作用。特別是RNA分子容易形成發(fā)夾、假節(jié)、凸起、莖環(huán)、G四聚體等二級結構，更容易與蛋白質(zhì)、核酸和核酸相互作用。但它在體內(nèi)很容易被核酸酶降解，必須進行修飾，如嘧啶環(huán)的2'2F和2'2NH修飾。與RNA相比，DNA的生產(chǎn)成本較低，在體內(nèi)相對穩(wěn)定，不易被降解。從構建的文庫中篩選出的適配體（Adaptor Protein）更適合體外診斷和體內(nèi)治療。它可以與自然界中幾乎所有類型的分子相互作用。特別是RNA分子容易形成發(fā)夾、假節(jié)、凸起、莖環(huán)、G四聚體等二級結構，更容易與蛋白質(zhì)、核酸和核酸相互作用。但它在體內(nèi)很容易被核酸酶降解，必須進行修飾，如嘧啶環(huán)的2'2F和2'2NH修飾。與RNA相比，DNA的生產(chǎn)成本較低，在體內(nèi)相對穩(wěn)定，不易被降解。從構建的文庫中篩選出的適配體（Adaptor Protein）更適合體外診斷和體內(nèi)治療。核酸和核酸。但它在體內(nèi)很容易被核酸酶降解，必須進行修飾，如嘧啶環(huán)的2'2F和2'2NH修飾。與RNA相比，DNA的生產(chǎn)成本較低，在體內(nèi)相對穩(wěn)定，不易被降解。從構建的文庫中篩選出的適配體（Adaptor Protein）更適合體外診斷和體內(nèi)治療。核酸和核酸。但它在體內(nèi)很容易被核酸酶降解，必須進行修飾，如嘧啶環(huán)的2'2F和2'2NH修飾。與RNA相比，DNA的生產(chǎn)成本較低，在體內(nèi)相對穩(wěn)定，不易被降解。從構建的文庫中篩選出的適配體（Adaptor Protein）更適合體外診斷和體內(nèi)治療。

SELEX技術特點
（1）庫容量大，適應范圍廣；靶標沒有限制，包括蛋白質(zhì)、核酸、小分子有機物，甚至金屬離子。
(2)高分辨率。根據(jù)Jenison等人的研究結果，用茶堿篩選得到的適體與茶堿結合的解離常數(shù)Kd為0.1mol/L，或在嘌呤環(huán)的N7位上沒有甲基。
(3)親和力高。以蛋白質(zhì)為目標物質(zhì)，適配體的解離常數(shù)可以達到nmol/L的水平，甚至pmol/L的水平。對于Mr較小的目標物質(zhì)，解離常數(shù)也可以達到mol/L—nmol/L的水平。
(4)篩選過程比較簡單、快速、經(jīng)濟。一般情況下，典型的SELEX篩選過程可在2至3個月內(nèi)完成，篩選出的適配體的小規(guī)模合成和純化不超過3天。無需特殊儀器和試劑，一般實驗室即可完成。篩選抗體至少需要3至6個月，費力且成本高。篩選的自動化和規(guī)模化可以實現(xiàn)更多、更快、更經(jīng)濟的適體生產(chǎn)。最近，Men-donsa 等人。報道稱，當SELEX與毛細管電泳相結合時，只需幾天的時間就可以篩選出對目標分子具有高親和力和高特異性的寡核苷酸適配體。
(5)篩選的實用性。篩選適配體（Adaptor Protein）可定時、定量、保質(zhì)，適配體的變性和復性快速、可逆、可重復使用、可在室溫下長期保存和運輸，相對于抗體和其他蛋白分子具有較強的實用性。篩選條件可以根據(jù)篩選出的適配體的不同性質(zhì)人為設定，合成時可以隨意連接其他官能團或分子（如生物素、巰基、甲基），以滿足用戶的需求。需要。
(6)適配體尺寸小。作為藥物施用時，僅產(chǎn)生很低的免疫原性，但具有很強的腫瘤穿透力，并且易于在體內(nèi)清除。