細胞復蘇時血清更換注意事項及步驟

血清更換注意事項及步驟

一、推薦在復蘇時步驟：

1.首先準備一只15ml離心管，加入3倍以上體積培養基（含10%澳范血清，1%青鏈霉素的適配培養基，具體培養基類型查詢ATCC）。

2.將需要復蘇的凍存管放于37℃水浴鍋中（液面沒過凍存液），并持續輕柔晃動凍存管，直至冰晶消失。

2.迅速轉移細胞至無菌操作臺，酒精棉球擦拭干凈凍存管表面后開蓋。

3.輕柔地將細胞轉移至已經準備好的無菌離心管，800-1000g離心5min（不同離心機離心力不同，請選擇合適離心力），棄去上清，用上述培養基重懸細胞，放入37℃，5%二氧化碳培養箱培養。并隔天更換培養基。

二、對于對數生長期的細胞，推薦按梯度更換血清：

         將上述培養基與之前所使用培養基按1：1混勻后，采用換液法更換培養基。持續培養1代后更換為只含10%澳范血清的培養基。（其余所需物質照常添加）

三、不推薦直接更換血清：

        可能導致細胞營養不良，形態變皺縮/纖細，代謝和活性相關表型改變。

血清儲存及化凍

儲存：在 -15°C到-20°C低溫冰箱血清的保存期限為5年。

解凍：第一步：從-40°C--80°C超低溫冰箱取出后需在 -20°C冰箱平衡48小時。

           第二步：立放與水平搖床并開啟搖床。若解凍血清的時候無法使用搖床則在室溫下融化，前半小時內每隔5分鐘-10分鐘輕微晃動血清使其瓶底及瓶身周邊的纖粘蛋白融化。

4度冰箱解凍血清容易造成析出并丟失貼壁因子、會影響細胞的培養。

解析：血清中含有冷不溶蛋白較多如血清中纖粘蛋白（fibronection）屬于冷不溶蛋白，在4度解凍時，不會溶解，是以沉淀狀態在血清中。

           冰箱存在自動化霜功能，冰箱在化霜過程中箱體處于加熱狀態、貼近箱體底部及周邊儲存的試劑容易被溶解反復凍融影響質量。實驗室使用化霜冰箱的時候存放試劑時需避免直接存放在錫箔紙上面。