怎樣使用Trypan blue進行細胞計數？

生物學家可以利用多種儀器和消耗品檢測來探索總體細胞計數和細胞活力。血細胞計數法是手動細胞計數的傳統工具，Trypan blue是醫學和生命科學實驗室中使用普遍的細胞排除染料之一。然而，排除染料臺盼藍仍然是細胞計數應用的關鍵組成部分，而過時的血細胞計數器已逐漸被 DeNovix CellDrop™ 等創新型自動細胞計數器所取代。

 即使是基于載玻片的自動化細胞計數也無法與 CellDrop DirectPipette™技術建立的標準競爭 ，該技術可以提高臺盼藍等排除染料的功效。

Trypan blue是主要的細胞排除染料之一，用于區分溶液中的活細胞和死細胞，以計算總體活力。它通過滲透受損細胞膜并與細胞內蛋白質結合來對死細胞進行染色，從而產生深藍色外觀。這篇文章將更深入地探討臺盼藍細胞計數的一般原理和局限性。

概述Trypan blue細胞計數

Trypan blue是一種偶氮染料，用作多種排除染色劑之一，用于測量懸浮液中活細胞的數量，利用活細胞膜抵抗某些化學染色劑滲透的原理。用臺盼藍檢測的細胞懸浮液將理想地顯示具有透明細胞質（活細胞）和藍色細胞質（死細胞）的細胞。這有利于使用光學顯微鏡進行簡單的細胞計數。

典型臺盼藍細胞計數測試的一般程序如下：

• 將微量 (μl) 細胞懸浮液和 0.4% 臺盼藍染料在蛋白質緩沖系統 (PBS) 中混合，以達到所需的比例并使測定的樣品均質化。

• 在室溫下孵育適當的時間，以確保準確測量細胞活力。

• 可選：在細胞計數之前進行顆粒化和重懸，并根據需要過濾以去除溶液中的聚集物。

• 將微量樣品移入血細胞計數器的計數區域、細胞計數一次性玻片上，或直接移至 CellDrop 的光學計數室中。

• 使用血細胞計數器的網格線手動計數染色和未染色的細胞，或在自動細胞計數系統上運行適當的軟件，以自動獲取準確的活力測量值。

臺盼藍細胞計數的局限性

盡管Trypan blue被廣泛用于細胞計數和活力測試，但它也存在局限性，這使得傳統測量變得復雜。例如，與血清蛋白相比，Trypan blue對細胞蛋白的親和力降低，可能會為細胞形態的可視化創造具有挑戰性的條件。這可能需要對樣品進行分析，然后將其重新懸浮在額外的無蛋白質緩沖液中，然后才能進行細胞計數。