關于流式細胞分析的指南

流式細胞分析是一項實驗室細胞分析技術。回顧流式細胞分析基本概念、免疫檢測方法、流式細胞分析方案主要步驟和適當的對照有助于確保流式細胞分析的準確性。后文提供了一些有助成功開展流實驗的要點。

一、什么是流式細胞分析

流式細胞分析是一種可根據細胞物理和熒光特性，鑒定和/或分選異質懸浮細胞群的強大技術。這是一種單細胞分析方法，非常適合同時獲取大量細胞的單細胞水平定量信息，包括給定類型細胞數目和細胞內特定蛋白含量。

流式細胞分析的部分優勢包括快速、可在研究異質細胞群時區分不同細胞亞群的差異，同時支持分析異質性細胞群的亞群。流式細胞分析常用于免疫分型和免疫腫瘤學研究，可分析血液、骨髓和其他樣品類型的血液學差異。

二、流式細胞分析工作原理

流式技術依靠流體動力聚焦技術使細胞懸液樣品形成一股單細胞液流，通過激光束。根據細胞對入射光線的散射情況，可每秒數千顆粒的速率，檢測細胞大小和胞內復雜情況。隨后即將生成的模擬數據轉化為數字數據，進行定量和繪圖分析。

根據流式細胞測定結果，可確定特定的細胞群和其亞群并通過細胞分選法物理分離，此時會根據細胞的熒光特性控制其電荷大小，從而實現細胞顆粒的靜電偏轉。如需更精細地鑒定亞群，則要使用探針。貼壁細胞和實體組織成功分離并制成單細胞懸液后，也可采用該技術進行分析。

三、傳統流式細胞儀組件

關于流式細胞分析的低配置，即使是最基礎的單激光流式細胞儀，一般都會配置至少同時檢測4種熒光染料的濾光片。目前，單次實驗中最多甚至可區分18種波長的光線。

傳統流式細胞組件包括：

1.用于樣品處理和細胞分選的液流系統

流動室：樣品中的細胞通過流體動力學聚焦并流經激光照射區。

2.用于熒光檢測的光學系統

光通過一系列鏡片和濾光片。

根據大小、內部復雜成分和信號強度檢測細胞。

3.用于信號處理、計算機顯示和分析的電學系統

光電倍增管將光信號轉換為電信號。

信號隨后放大和數字化。