磁珠的使用技巧

純化是大多數分子生物學實驗中的常見程序，例如去除 PCR 反應中的短引物、未摻入的 dNTP、酶和鹽以及其他雜質。純化方法有多種，包括過濾、離心和分離。分離已成為生命科學中非常流行的方法，并使用各種類型的固相支持物。這包括瓊脂糖珠、瓊脂糖珠、二氧化硅珠和磁珠。使用磁珠分離是所有磁珠分離方法中最快、最干凈且有效的技術。

磁珠可以涂有針對抗原、抗體、蛋白質或核酸的特異性親和配體。將磁珠與樣品一起孵育后，對磁珠（和附著的生物分子）施加磁力，以將磁珠收集成濃縮顆粒。分離完成后，可以輕松去除上清液，并且可以從磁珠上洗脫與珠子結合的生物分子。

使用磁力操縱磁珠的能力使得洗滌步驟比使用瓊脂糖、瓊脂糖凝膠或硅珠更容易和更快。純化的產物還可以使用磁力分離方法以更濃縮的形式回收。

以下是給新用戶的一些提示：

1.       重懸珠子

磁珠需要有足夠的磁性含量，以便可以通過磁鐵簡單地下拉。傳統磁珠的尺寸超過 1 µm (1 µm = 1000nm)。較新的珠子尺寸更小（低至數百納米），以增加珠子表面積。這導致結合能力增加并改善分散性。磁珠是由氧化鐵組成的重顆粒，因此它們會隨著時間的推移而沉淀。珠子的尺寸越大，沉淀得越快。使用前渦旋并重懸磁珠非常重要，以重新分散磁珠并確保等分試樣之間的一致性。

2.       清洗珠子

增加洗滌步驟的數量有助于減少與磁珠的非特異性結合。用乙醇（用于核酸純化）或洗滌緩沖液洗滌磁珠時，請使用足夠的洗滌溶液覆蓋沉淀。

3.       了解珠子的特性

磁珠有不同的尺寸、形狀、磁響應、涂層、緩沖條件和附著的官能團。這些變量影響珠子的特性。獲取珠子的基本信息對于更好地了解如何處理它們非常重要。

4.       捕獲珠子

一般來說，磁珠會被磁鐵吸引并在一分鐘內形成顆粒。延長磁珠對磁鐵的吸引力，以確保所有磁珠均被回收。

5.       去除洗滌液時不要擾動珠粒

去除洗滌液或上清液時，傾斜移液器吸頭，使吸頭不接觸磁珠沉淀。這可以防止珠子與上清液重新混合。使用具有傾斜側面的磁力架，使珠粒集中在管壁的一側。這使得去除上清液變得更加容易。