jembio：DNA 連接酶（大腸桿菌）

jembio：DNA 連接酶（大腸桿菌）

DNA 連接酶（大腸桿菌）   DNA 連接酶（大腸桿菌）催化雙鏈 DNA 中并置的 5' 磷酸鹽和 3' 羥基粘性末端之間磷酸二酯鍵的形成。  

 描述：

 • 催化具有粘性末端的雙鏈DNA 片段之間磷酸二酯鍵的形成。 

• 5'-磷酰基與相鄰的3'-羥基的縮合與NAD+的水解相結(jié)合。

 • 適用于全長(zhǎng)cDNA 的高效克隆(1, 2)。 

單位定義：1 個(gè)單位定義為 lambda DNA 的 Hind III 片段產(chǎn)生 50% 連接所需的酶量。在 20 µl 檢測(cè)混合物中于 16°C 下孵育，DNA 末端濃度為 0.02 µM (50 µg/ml)。  儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存于-20oC。   反應(yīng)緩沖液：30 mM Tris-HCl（22°C 時(shí) pH 8.0）、1 mM 二硫蘇糖醇、4 mM MgCl2、26 µM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白。 最佳連接溫度為 16°C。   

儲(chǔ)存緩沖液：10 mM Tris-HCl（22°C 時(shí) pH 7.4）、50 mM KCl、0.1 mM EDTA、10 mM 硫酸銨、1 mM 二硫蘇糖醇和 50% (v/v) 甘油。   

質(zhì)量控制：所有制劑均經(jīng)過核酸內(nèi)切酶和核酸外切酶污染活性測(cè)試，以及連接反應(yīng)中的功能測(cè)試。 連接測(cè)定條件：30 mM Tris-HCl（22°C 時(shí) pH 8.0）、4 mM MgCl2、1.2 mM EDTA、1 mM 二硫蘇糖醇、0.026 mM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白和 lambda DNA 的 Hind III 片段。 16°C 孵育 30 分鐘。  

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