β氨基己糖苷酶活性測(cè)定試劑盒

β氨基己糖苷酶活性測(cè)定試劑盒

• 活性分析(AcA)，免疫分析(IA)
• 樣本類型
• 血漿，血清
• 特征

• β氨基己糖苷酶活性測(cè)定試劑盒是一種簡單的熒光測(cè)定法，在96孔微量滴定板中測(cè)量β氨基己糖苷酶活性。每個(gè)試劑盒提供足夠的試劑進(jìn)行多達(dá)100項(xiàng)分析，包括空白、β氨基己糖苷酶陽性質(zhì)控品和未知樣品。

成分

1. 重組β氨基己糖苷酶:一瓶25 μL的50 μg/mL重組人β氨基己糖苷酶。
2. 10X底物:一個(gè)500 μL樣品瓶。
3. 5X檢測(cè)緩沖液:一個(gè)30毫升的瓶子。
4. 10X中和緩沖液:一個(gè)30毫升的瓶子2個(gè)

• 1X檢測(cè)緩沖液:用去離子水以1:5的比例稀釋儲(chǔ)備5X檢測(cè)緩沖液，制成1X溶液。攪拌或渦旋至均勻。在室溫下儲(chǔ)存未使用的1X檢測(cè)緩沖液。
• 1X底物:用1X檢測(cè)緩沖液以1:10的比例稀釋10X底物。例如，為每個(gè)使用的孔添加5μL 10X底物到45μL 1X檢測(cè)緩沖液中。注意:只準(zhǔn)備足夠立即使用的1X基底。

• 1X中和緩沖液:用去離子水將儲(chǔ)備的10X中和緩沖液以1:10稀釋成1X溶液。攪拌或渦旋至均勻。在室溫下儲(chǔ)存未使用的1X中和緩沖液。







化驗(yàn)程序

1. 向96孔微量滴定板中加入50μLβ氨基己糖苷酶樣品。
2. 向每個(gè)孔中添加50μL 1X底物。
3. 避光37°C孵育15分鐘。
4. 向每個(gè)孔中添加100μL 1X中和緩沖液。

5. 使用微孔板熒光計(jì)在365 nm的激發(fā)波長和450 nm的發(fā)射波長下讀取板。

• 儲(chǔ)存；儲(chǔ)備
• -80攝氏度
• 存儲(chǔ)注釋
• 收到后，將重組β氨基己糖苷酶和10X底物儲(chǔ)存在-80°c下。將剩余成分儲(chǔ)存在室溫下。

僅供研究使用

• 背景
• 己糖胺酶是一種從N-乙酰基-β-D-己糖胺中水解末端N-乙酰基-D-己糖胺殘基的酶。這種酶定位于細(xì)胞溶酶體，是由α或α亞單位形成的二聚體，產(chǎn)生三種可能的二聚體組合。α組合(同工酶A)是具有已知功能的組合:在體內(nèi)水解GM2神經(jīng)節(jié)苷脂。αα(同工酶B)和α(同工酶S)的另外兩種組合已在細(xì)胞組織中觀察到，但它們的功能未知。同工酶A與輔因子GM2激活蛋白聯(lián)合作用，降解GM2神經(jīng)節(jié)苷脂和其他具有末端N-乙酰氨基己糖的分子。編碼亞單位的基因突變會(huì)導(dǎo)致山德霍夫癥。α亞單位位點(diǎn)的突變減少了GM2神經(jīng)節(jié)苷脂的水解，這是泰-薩克斯病的主要原因。雖然溶酶體己糖胺酶的α和α亞基都可以切割GalNAc殘基，但只有α亞基能夠水解GM2神經(jīng)節(jié)苷脂，因?yàn)棣羴喕杏幸粋€(gè)關(guān)鍵殘基Arg-424和一個(gè)由氨基酸序列形成的環(huán)結(jié)構(gòu)。GM2激活蛋白作為轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白將GM2神經(jīng)節(jié)苷脂定位于己糖胺酶，因此功能性己糖胺酶能夠?qū)M2神經(jīng)節(jié)苷脂水解為GM3神經(jīng)節(jié)苷脂。

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