用于小鼠的 mNSET 設(shè)備 60010 非手術(shù)胚胎移植說明

處理

設(shè)備僅限一次性使用。使用后丟棄。

在 mNSET 胚胎移植之前

為了生產(chǎn)用于移植的小鼠胚胎和作為受體的假孕雌性，使用了標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因方法。1按照標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因程序與雄性和雌性小鼠交配。如果需要，女性捐贈(zèng)者可以進(jìn)行超數(shù)排卵。胚胎在 EmbryoMax® KSOM 培養(yǎng)基 (Millipore#MR-106-D) 或所需培養(yǎng)基中孵育。胚胎應(yīng)在 mNSET 轉(zhuǎn)移當(dāng)天交配后 3.5 天（3.5 dpc）；受體雌性小鼠在 mNSET 轉(zhuǎn)移當(dāng)天應(yīng)為 2.5 dpc。

mNSET 演示視頻

快速程序和完整程序演示視頻可在此處查看和下載。快速程序視頻演示了使用 mNSET™（非手術(shù)胚胎和精子移植）小鼠 60010 設(shè)備如何輕松完成小鼠子宮胚胎移植。完整程序視頻詳細(xì)介紹了整個(gè)設(shè)置和準(zhǔn)備，直至實(shí)際程序結(jié)束.

胚胎移植程序

1. 將 15μl 培養(yǎng)基滴到 60 mm 組織培養(yǎng)皿（Falcon 353002 或類似物）的蓋子上。

2. 使用標(biāo)準(zhǔn)胚胎處理移液器將 12–20 個(gè)囊胚裝入培養(yǎng)基中。 （注意：要移植的胚胎的最佳數(shù)量將根據(jù)小鼠品系和胚胎接受的操作而有所不同。）

3. 將 mNSET 設(shè)備放在已設(shè)置為 1.8μl 的 P-2 移液器上。（推薦的移液器是移液器Rainin Classic PR2，0.1-2μl或Gilson Pipetman P2，0.2-2μl。

4.按下移液器柱塞到第一停止，將mNSET裝置的下端放入培養(yǎng)基中，然后慢慢將胚胎拉入下端。從介質(zhì)中取出 mNSET 設(shè)備下端。

5.小心地將移液器設(shè)置為2.0μl，以在mNSET下端產(chǎn)生一個(gè)小氣泡，以幫助確保胚胎在插入鼠標(biāo)期間留在設(shè)備下端內(nèi)。輕輕地將裝有吸頭的移液器放在一邊（靠近籠子），以便在步驟#9中使用。避免推擠 mNSET 下端。

6.將未麻醉的受體雌性放在帶有金屬架的籠子頂部，讓鼠標(biāo)“抓住"籠子桿表面。用拇指和食指抓住尾巴的根部，將尾巴向上傾斜，同時(shí)用手的另一邊輕輕按壓尾巴的根部。（見下圖。